PRÀCTICA 1.
PRÀCTICA 1
1ª PART:
VISUALITZACIÓ DE CÈL·LULES SANGUÍNIES
OBJECTIU
Visualitzar una mostra de sang perifèrica anticoagulada al microscòpi òptic.
Gràcies al microscòpi podem observar els elements formes que composen la sang, aquesta tècnica permet l'estudi d'aquestes cèl·lules, desde el punt de vista estructural y morfològic.
Al microscòpi podem vore eritrocits, aquests representen el 95% dels components de la sang, son cèl·lules sense nucli i el citoplasma està constituit per hemoglobina i enzims. La seua funció es el transport de gasos a través de la sang per l'organisme.
Podríem vore també leucocits o glòbuls blancs, les cèl·lules de defensa del sistema inmunitari, son les responsables de detectar i destruir microorganismes, cèl·lules infectades o extrañes. Els diferents tipus es diferencien per la forma del nucli i la presencia de grànuls citoplasmàtics i marcadors antigènics de membrana.
Per ùltim podríem vore plaquetes també, fragments irregulars procedents de la fragmentació del citoplasma de la cèl·lula megacariocítica (present a la mèdula òssia). Aquests s'encarreguen de formar el coàgul sanguini al procès de coagulació.
MATERIAL
-Bata i guants
-Mostra de sang
-Microscòpi òptic
-Portaobjectes
-Cobreobjectes
-Pipetes Pasteur
-Centrífuga
-Tubs d'assaig
-Parafilm
-Pipeta de vidre
TÉCNICA.
La tècnica que anem a utilitzar està basada l'homogenització de la mostra de sang anticoagulada i posterior visualització al microscòpi.
PROCEDIMENT
1- Preparem la zona de treball.
2- Agitem la mostra manualment varies vegades sense força, per que la mostra quede homogènia.
3- Agafem una mostra amb la pipeta Pasteur i seguidament depositem una gota al portaobjectes.
4- Col·loquem el cobreobjectes damunt de la gota amb cura de que no quede aire, desde un extrem del portaobjectes el deixem caure.
5- Agafem el portaobjectes ja preparat i el dugem hasta el microscòpi.
6- Observem desde el augment de 4x, pasem per 10x i aconseguim vore en 40x de manera nítida.
7-Observem els resultats
8-Neteja de la zona de treball.
RESULTATS
OBSERVACIONS
Tindre en compte una bona homogenització abans d'agafar la mostra per que es puguen mesclar els elements formes amb el plasma, ja que al estar en repòs s'han vist separades en dos fases diferents.
2ª PART
SEPARACIÓ DE FASES PER CENTRIFUGACIÓ
OBJECTIU
Aconseguir separar les dues fases de la mostra de sang perifèrica per centrifugació.
FONAMENT
La sang perifèrica anticoagulada està composta per els elements formes i el plasma sanguini, el plasma es la part líquida de la sang on están dispersos els elements formes, constitueix aproximadament el 55% del volum sanguini. Té un aspecte groguenc translúcit i la seua composició és quasi tot aigua amb soluts (proteïnes, lípids, hormones, enzims...), grácies a aquest la sang és distribuida per l'organisme, així amb els nutrients i arreplegant substàncies de rebuig.
La mostra quedarà separada en dues fses ja que els elements formes sedimentarán i el plasma quedará visible a la part superior per diferències de densitat. Aquest és un procés reversible, es pot tornar a la mostra original simplement homogenitzant la mostra centrifugada.
MATERIAL
-Mostra de sang perifèrica anticoagulada (EDTA)
-Centrífuga
-Tub de centrífuga
-Parafilm
-Pipeta Pasteur
TÉCNICA/PROCEDIMENT
1-Preparem l'àrea de treball
2-Homogenitzem la mostra de sang amb cura i comprobant que quede mesclat.
3-Agafem 3ml de la mostra de sang amb la pipeta Pasteur i l'introduim al tub de centrífuga.
4-Col·loquem el parafilm perque no puguen haver fuges.
5-Introduim el tub dins de la centrífuga amb compte de que els tubs queden compensats.
6-Tanquem i programem 30 minuts a 1500rpm.
7-Una vegada finalitza, tornem a centrifugar 5 minuts a 2500 rpm.
8-Quan finalitza esperem a que es detinga el rotor i obrim per a agafar els tubs.
9-Observem la mostra separada en les dos fases.
RESULTATS
A aquesta fotografía podem observar les diferents fases de la mostra, els elements formes han sedimentat i queden al fons del tub, el plasma queda en major proporció a la part superior.
OBSERVACIONS
La centrífuga ha de quedar compensada amb tubs enfrontats de manera que quede amb el mateix pes.
Potser el resultat quedara hemolitzat, ho indica el color roig del plasma, açò ocorre al centrifugar massa la mostra.
3ª PART
OBTENCIÓ DE PLASMA SANGUÍNI
OBJECTIU
Almacenar el plasma de la mostra centrifugada de sang perifèrica anticoagulada.
FONAMENT
El plasma es la part líquida de la sang, constitueix el 55% del volum i s'obté per centrifugació de sang perifèrica anticoagulada.
Té un aspecte groguenc translúcit i la seua composició és quasi tot aigua amb soluts (proteïnes, lípids, hormones, enzims...), grácies a aquest la sang és distribuida per l'organisme, així amb els nutrients i arreplegant substàncies de rebuig.
Segons la força centrífuga aplicada es poden obtindre:
- Plasma ric en plaquetes (PRP) centrifugant a 500-1000rpm 3-5 minuts. Aquest queda amb aspecte turbio al no ser capaç de sedimentar totes les plaquetes.
-Plasma pobre en plaquetes (PPP) s'obté a 2.500-3.000 rpm durant 10 minuts, aquest té un aspecte translúcit ja que totes les plaqutes han sedimentat.
Nosaltres obtindrem plasma pobre en plaquetes pel temps y les rpm programades.
MATERIALS
-EPIS
-Mostra de sang
-Pipeta Pasteur
-Centrífuga
-Eppendorf
-Pipeta de vidre
TÉCNICA/PROCEDIMENT
1-Preparar l'àrea de treball
2-Agafar la mostra prèviament centrifugada i retirar el parafilm amb cura.
3-Amb una pipeta de vidre o Pasteur recollir el sobrenadant del tub, que seria el plasma, amb compte de no travessar a la fase forme sedimentada.
4-Depositar-ho al Eppendorf, etiquetar i almacenar-lo al congelador.
5-Netejar l'àrea de treball.
RESULTATS
L'Eppendorf quedà amb la mostra de plasma que vam obtindre en la part anterior, el guardarem al congelador per poder utilitzarlo en pròximes pràctiques.
OBSERVACIONS
No centrifugar massa la mostra per evitar hemòlisis.
Tindre en compte no sobrepassar la fase forme al recollir el plasma del tub, en aquest cas obtindriem elements formes i no es el que busquem.
4ª PART
OBSERVACIÓ DE PREPARACIONS TENYIDES.
OBJECTIU
Observar al microscòpi òptic preparacions ja tenyides de mostres de sang.
FONAMENT
Les tincions convencionals s'utilitzen per acolorir estructures de cèl·lules sanguínies que nos som capaços de diferenciar, augmentant el contrast entre aquestes i el medi que les envolta, facilitant l'identificació de diferents tipus celulars al microscòpi.
Aquestes tincions es poden diferenciar en convencionals policromes o supravitales, les policromes utilitzen cèl·lules mortes i es fixen abans de tenyir, en canvi les supravitals treballen amb cèl·lules vives i no requereixen de fixació prèvia.
MATERIALS
-EPIS
-Portaobjectes amb preparacions tenyides
-Oli d'inmerssió
-M.O
TÉCNICA/ PROCEDIMENT
1-Preparar l'àrea de treball
2-Agafarem una de les preparacions i observarem al microscòpi desde l'augment 4x fins al 100x, abans d'aquest últim afegim una gota d'oli d'inmerssió al portaobjectes per poder visualitzarlo.
3-Observem la preparació
4-Netejar la zona de treball
RESULTATS
A aquesta preparació vam visualitzar estructures cel·lulars d'una mostra sanguínia tenyida, es poden diferenciar cèl·lules tenyides i els agregats. Pensem que pot ser una tècnica de Wright.
OBSERVACIONS
Utilitzar oli d'inmerssió amb l'augment 100x.
Comentarios
Publicar un comentario