PRÁCTICA 3

PRÁCTICA 3

TINCIONES EN EXTENSIÓN SANGUÍNEA

1ª PARTE: 
REALIZACIÓN DE 3 EXTENSIONES SANGUÍNEAS CORRECTAS

OBJETIVO
Conseguir hacer una extensión de sangre periférica correctamente

FUNDAMENTO
La extensión de sangre periférica consiste en realizar una capa fina de sangre sobre un portaobjetos para realizar un análisis morfológico de las células sanguíneas con ayuda de un microscopio y de tinciones.
Existen diferentes técnicas, nosotros utilizamos la de portaobjetos en cuña, donde se necesitan dos portaobjetos de cristal muy limpios, uno de ellos se utiliza de soporte y el otro de extensor.
Las características de la extensión bien hecha debe ser, lisa, sin agujeros ni rayas, con los bordes visibles y separados aproximadamente 1mm del borde de la puerta y con una disminución progresiva y continua del grosor, desde el principio hasta el final.
Se podrán distinguir tres zonas:
La cabeza, zona inicial más grande, donde los hematíes pueden formar más de una capa y se encuentra con mayor proporción de linfocitos.
El cuerpo, la zona del medio, los hematíes estarán en una sola capa y los leucocitos mantienen una proporción equilibrada, es la zona ideal de visualización.
La cola, zona final, más fina donde los hematíes se disponen de forma acordonada dejando sitios entre ellos y con mayor proporción de leucocitos grandes y plaquetas grandes, esta cola termina con forma redonda con el borde deshecho (barba).

MATERIALES
-EPIS
-Muestra de sangre periférica con anticoagulante (EDTA)
-Portaobjetos (3)
-Pipeta de vidrio
-Gradilla
-Vaso con dilución de lejía.

TÉCNICA
Nosotros utilizaremos la técnica del portaobjetos en cuña.

PROCEDIMIENTO
1-Preparamos el área de trabajo
2-Homogenizamos la muestra y cogemos una gota de sangre con la pipeta (3mm aprox.) y la depositamos cerca de uno de los extremos del portaobjetos de soporte.
3- Colocamos el portaobjetos extensor sobre el soporte, por delante de la gota con el ángulo (35-45º)orientado hacia la gota, de forma que la extensión se hace hacia el extremo opuesto.
4-Hacemos contacto con la gota tocando con el puerta extensor, por capilaridad se extenderá por su extremo.
5-Seguidamente deslizamos el puerta extensor sobre toda la longitud del portaobjetos de soporte, con un movimiento rápido, suave y continuo, manteniendo en todo momento el ángulo y una presión homogénea. Se extenderá de forma uniforme formando una monocapa de 3/4 de la longitud del portaobjetos de soporte.
6-Dejamos secar en el aire la extensión.

RESULTADOS
Hemos hecho 3 extensiones repetidas veces hasta que han salido de manera correcta.



OBSERVACIONES
Tuvimos que repetir varias veces la extensión ya que nos falta practicar la técnica.

2ª PARTE: TINCIÓN DE MAY GRÜNWALD-GIEMSA

OBJETIVO
Obtener una tinción May Grünwald-Giemsa.

FUNDAMENTO
Es una de las tinciones policromas más utilizadas en el laboratorio de hematología, se basa en la combinación de colorantes May Grünwald(solución de eosina y azul de metileno en metanol, actúa como fijador, colorante básico que tiñe componentes celulares ácidos) y Giemsa(mezcla de eosina y derivados del azul de metileno, colorante ácido que tiñe de matices rojos componentes celulares básicos ), en solución acuosa se ionizan y se combinan con los distintos componentes celulares, según sus afinidades, generando sales insolubles con diferentes matices de coloración.
Los componentes neutros reaccionan con ambos generando diferentes matices según su proporción. 
Se debe tamponar.

MATERIALES
-Ambos portas con extensiones sanguíneas
-Agua destilada
-Pipeta de vidrio
-Puente de tinción
-Pipeta 10ml
-Probeta 5ml

PROCEDIMIENTO
Se deben diluir ambos colorantes teniendo en cuenta la concentración inicial de los reactivos, distinta en cada fabricante.
1-Colocar la extensión en el puente de tinción
2-Cubrir la extensión con solución de May Grünwald inicial (fijador) 2 minutos.
3-Volcar y escurrir el sobrante.
4-Cubrir la extensión con solución diluida de May Grünwald 1 minuto.
5-Volcar y lavar con agua destilada.
6-Cubrir la extensión con solución diluida de Giemsa 20 minutos.
7-Volcar para eliminar el colorante, lavar, escurrir y dejar secar al aire.
8-Limpiar y recoger la zona de trabajo.

RESULTADOS

Por un lado tenemos las extensiones en la tinción de giemsa y una vez terminaron los 20 minutos, lavamos y escurrimos, los etiquetamos y almacenamos seguido de esto en una caja de portas para su posterior visualización.















3ª PARTE: TINCIÓN PANÓPTICA RÁPIDA

OBJETIVO
Obtener una extensión teñida con panóptica rápida.

FUNDAMENTO
Esta tinción es un método muy utilizado en laboratorios de urgencias, combina las técnicas policromas cásicas, May Grünwald-Giemsa y Wright, para conseguir una mayor rapidez en su ejecución.

MATERIALES
-Extensiones en portas
-Vasos de precipitados
-Pinzas de madera
-Agua destilada

PROCEDIMIENTO
1-Preparamos 3 cubetas de tinción con los tres reactivos.
2-Sumergimos el porta con ayuda de las pinzas en la solución fijadora, deben ser 5 inmersiones de 1 segundo cada una, escurrimos el exceso sobre el papel de filtro y pasamos a la siguiente inmersión.
3-Sumergimos en la cubeta de colorante ácido tamponado, 5 inmersiones de 1 segundo cada una y escurrimos.
4-Sumergimos en la cubeta de colorante básico tamponado, 5 inmersiones de 1 segundo cada una, escurrimos.
5-Lavamos y dejamos secar al aire.
6-Limpiar y recoger la zona de trabajo.

RESULTADOS
Al igual que en la 2ª parte, después de lavar y dejar secar, etiquetamos y almacenamos las muestras en una caja de portas para su posterior visualización

OBSERVACIONES
Especial cuidado con los tintes.

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